原理
測定的基礎是抗原-抗體反應。微孔板上包被有抗抗體。加入嘔吐毒素(DON)標準品或樣品、酶標抗原和抗體后,游離的嘔吐毒素與酶標抗原競爭結合抗體,抗體或抗體結合物與固定在微孔板上的抗抗體再結合,沒有結合的標準品、酶標抗原及抗體被洗去,加入TMB底物顯藍色,加入終止液后顏色由藍變黃,用酶標儀在450nm處檢測,吸光值與樣品中嘔吐毒素含量成負相關,與標準曲線比較即可得出嘔吐毒素的含量。
注意事項
1)室溫低于20℃或試劑及樣品未回到室溫(20- 25℃)會導致數值偏低。
2)在洗板過程中如果出現板孔干燥過久的情況,則會出現標準曲線不成線性,重復性不好的現象。所以洗板排干后應立即進行下一步操作。
3)標準物質和顯色液對光敏感,避免直接暴露在光線下。
4)混合要均勻,洗板要干凈(包括加樣品和標準液的時候都必需充分混合均勻)。
5)終止液為強酸性物質,避免接觸皮膚。
6)不要使用過了有效期的試劑盒,也不要混合使用不同批次的試劑盒,這樣會引起測定結果不準確。
7)試劑盒的儲存條件是2-8℃,切勿冷凍。